Качественный и количественный анализ ПЦР на гепатит С

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, — это один из самых современных лабораторных тестов, использующихся как в инфектологии, так и в других областях медицины и научно-исследовательских программах. Я, как врач, часто применяю этот метод в своей практике с целью диагностики заболеваний и подбора схемы терапии и сегодня хочу рассказать о том, что собой представляет качественный анализ на гепатит С, какие еще виды ПЦР при данной патологии могут быть востребованы и для чего они предназначены.

Показания

ПЦР, в расшифровке полимеразная цепная реакция, — это относительно новый для медицины метод диагностики. Его суть состоит в том, что в ходе проведения анализа увеличивается концентрация нуклеиновых кислот, содержащихся в используемом для тестирования образце (например, в крови). Результатом становится обнаружение молекулы ДНК или РНК — основы генетического материала инфекционного агента.

Таким образом, ПЦР позволяет обнаружить вирус гепатита С в организме больного.

Это РНК-содержащий, то есть имеющий в геноме рибонуклеиновую кислоту, возбудитель. В медицинской литературе применимо к нему можно встретить обозначения ВГС и HCV. Исследование ПЦР используют:

  • с целью подтверждения факта инфицирования;
  • для оценки тяжести течения, определения формы болезни и очерчивания прогноза;
  • при подборе терапии и для контроля ее эффективности;
  • для определения генотипа вируса HCV.

Сегодня существуют разные методики ПЦР, и о них мы поговорим далее.

Клиническое значение

ПЦР позволяет определить вирусную нагрузку — активность размножения возбудителя и, соответственно, потенциал его агрессии. Однако метод не дает возможности выяснить стадию течения HCV-инфекции и не должен становиться единственным специфическим, то есть целенаправленным, тестом в схеме диагностики. Обычно его комбинируют с ИФА — иммуноферментным анализом (на антитела гепатита).

Качественный тест

Широко используется на разных этапах диагностики инфекционного поражения печени. Позволяет обнаружить РНК вируса гепатита С и таким образом подтвердить наличие возбудителя в организме больного, даже если нет клинических проявлений.

Преимуществом методики является возможность выяснить факт заражения максимально рано, при необходимости и подозрении на вероятность инфицирования — еще до появления антител, недостатком — отсутствие количественной оценки концентрации вирусных частиц в крови, то есть виремии. Результат выдается как «плюс» или «минус» и в норме выглядит следующим образом: «ПЦР отрицательный».

Количественный тест

Его применяют у пациентов всех возрастных групп для определения инфекционной нагрузки — виремии. Под этим термином понимают концентрацию РНК вируса гепатита С в крови. Количественное исследование дает возможность:

  • подтвердить или опровергнуть факт инфицирования;
  • не только обнаружить вирус гепатита C, но и выяснить его генотип, что важно для подбора терапии и формулировки прогноза;
  • оценить эффективность воздействия лекарственных средств.

Хочу отметить, что количественный анализ ПЦР стоит дороже, чем более простой вариант с ответом «плюс» или «минус». Он не назначается без показаний.

В обычной практике его применяют, как правило, после того как будет получено первичное подтверждение факта инфицирования (либо качественным тестом, либо исследованиями на антитела к вирусу HCV группы ИФА).

Расшифровка

Качественный анализ интерпретируется достаточно просто: либо РНК, то есть генетический материал вируса гепатита С, есть, либо отсутствует (ПЦР отрицательный). В первом случае говорят о факте инфицирования. Заметьте, не обязательно болезни, так как существуют варианты латентных (скрытых форм). Во втором — об отсутствии возбудителя в организме.

Количественный анализ на гепатит С расшифровывается в соответствии с попаданием результата пациента в диапазон показателей:

Уровень виремии

РНК HCV, концентрация, значения

Копий/мл

ME/мл

Низкий

102—104

До 3x

Средний

105—107

До 8x

Высокий

108 и ↑

↑ 8x

Согласно современным протоколам, используются также понятия «пограничных данных»: результаты с уровнем РНК HCV до 400000 МЕ/мл принимаются за значения низкой вирусной нагрузки, а при его превышении виремию считают высокой.

Норма всегда одинакова, вне зависимости от выбранного варианта методики и используемого образца, — отсутствие вируса в исследуемом материале (поэтому ПЦР количественный тоже может быть отрицательным).

Согласно рекомендациям ВОЗ (Всемирной организации здравоохранения), подтвердить диагноз гепатита C можно только троекратным позитивным ПЦР.

Я уже упоминала о том, что в реальной практике метод комбинируют с ИФА, поэтому далеко не всегда обязательно отправлять пациента на дополнительное тестирование. Но повторные анализы могут потребоваться в спорных случаях. Нельзя полагаться на единственный «плюс» результата ПЦР и на его основании говорить о наличии инфекции.

Пример бланка анализа ПЦР на гепатит С

Клинический случай

Метод ПЦР востребован — и в доказательство я могу привести объективный пример из собственной практики. Так, я консультировала пациентку М. 24 лет, которая обратилась ко мне с желанием проверить факт инфицирования вирусными гепатитами B и C. Основание для беспокойства — процедура у косметолога, после которой стало известно о недобросовестной обработке многоразового инструментария. Симптомов поражения печени у М. не было.

Пациентка прошла обследование (анализ крови общий, биохимический, ИФА на антитела к вирусам гепатита B и C, качественные тесты ПЦР на указанные инфекции). Факт инфицирования не подтвердился, она признана здоровой.

Совет специалиста

Прочитав статью, вы уже знаете, что, если РНК возбудителя гепатита С есть, это означает наличие инфекции в организме. Даже если жалобы на состояние здоровья отсутствуют, стоит проконсультироваться с врачом: вирус HCV может долгое время никак не проявлять себя и обнаруживаться яркой симптоматикой уже на стадии цирроза или рака печени, когда неблагоприятный процесс становится необратимым.

Я также хотела бы отметить, что существуют ситуации ложного отрицательного ответа ПЦР. Это может произойти:

  • если вирусная нагрузка очень низкая;
  • в случаях, когда выбрана аналитическая система с неподходящим уровнем чувствительности;
  • при ошибках в процессе работы с образцом.

Важна также правильная подготовка к анализу. Со стороны пациента это сдача крови натощак и отказ накануне забора от жирной пищи и алкоголя.

Последовательное выполнение тестов ПЦР лучше проводить в одной лаборатории.

Это правило практикуется для того, чтобы избежать погрешности при сравнении результатов из-за применения разных методик определения РНК (например, если исследование проводится на этапе диагностики, перед назначением терапии и после курса приема препаратов).

Надеюсь, прочитанная информация оказалась полезной. В комментариях вы можете оставить свои отзывы и мнения о материале и собственном опыте применения ПЦР в диагностике гепатита C.

С этим читают

Отзывы и комментарии